L'ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) est une méthode de diagnostic immunologique utilisée pour détecter et quantifier des substances spécifiques, telles que des anticorps ou des antigènes, dans un échantillon biologique. Cette technique repose sur l’interaction spécifique entre un antigène et un anticorps, et utilise une enzyme comme marqueur pour générer un signal détectable (souvent un changement de couleur), qui est proportionnel à la quantité de la substance ciblée présente. L'ELISA est largement utilisée dans le diagnostic des maladies infectieuses, grâce à sa sensibilité élevée, sa spécificité et sa capacité à traiter un grand nombre d’échantillons simultanément.
Notre expertise en ELISA
Chez BioSellal, nous mettons à disposition de notre clientèle une expertise approfondie dans le développement, l'optimisation et la validation de kits ELISA, afin de répondre aux besoins actuels en diagnostic. Nos réactifs ELISA sont conçus pour assurer une détection à la fois sensible et spécifique des anticorps dirigés contre des pathogènes d’intérêt, en fonction des espèces animales. Ces outils diagnostiques sont essentiels pour le contrôle des maladies infectieuses au sein des troupeaux.
Tous nos kits sont validés conformément aux normes françaises U47-310 et U47-019 (AFNOR).
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PRATICITÉ
Nos réactifs ELISA sont prêts à l'emploi et leurs composants sont colorés pour permettre une distinction facile. Nos kits sont monocupules et à barrettes sécables.
RAPIDITÉ
Nos protocoles d'incubation sont optimisés pour être aussi courts que possible tout en garantissant la fiabilité des résultats. Cela permet une analyse rapide des échantillons.
FIABILITÉ
Pour assurer la qualité de vos résultats, un Matériau de Référence Interne (MRI) est disponible pour chaque application.
Il est recommandé d’utiliser un Matériau de Référence Interne (MRI) afin d’améliorer le suivi et la reproductibilité des résultats. Les MRI permettent un contrôle de la fiabilité du test au moyen d'une carte de contrôle. Il est fortement conseillé de les utiliser pour chaque test afin de garantir la précision des résultats.
Pour en savoir plus sur nos applications ELISA et nos solutions de diagnostic, n'hésitez pas à nous contacter.
A propos de la technique ELISA
PRINCIPE DE L'ELISA INDIRECT
L'ELISA indirect permet de détecter et de quantifier les anticorps spécifiques présents dans un échantillon en exploitant la spécificité des interactions antigène-anticorps et l'utilisation d'anticorps secondaires marqués. Voici les étapes principales de cette technique :
➜ Immobilisation de l'antigène : L'antigène spécifique est fixé à la surface des puits d'une plaque de micro-titration. Cet antigène est celui contre lequel les anticorps à détecter sont dirigés. Après l’immobilisation, un lavage est effectué pour éliminer l’excès d'antigène non lié.
➜ Saturation : Une solution de saturation est ajoutée pour bloquer les sites de liaison non spécifiques sur la surface du puits. Cette étape évite la fixation de protéines autres que celles ciblées, réduisant ainsi les réactions non spécifiques.
➜ Incubation avec l'échantillon : L’échantillon (souvent du sérum, du plasma ou du lait) contenant les anticorps ciblant l'antigène est ajouté. Si des anticorps spécifiques sont présents, ils se lieront à l'antigène immobilisé dans les puits.
➜ Lavage : Plusieurs étapes de lavages sont effectuées pour éliminer les anticorps non liés et autres composants non spécifiques de l'échantillon.
➜ Ajout de l'anticorps secondaire (anticorps de détection) : Un anticorps secondaire, spécifique à l'anticorps primaire, est ajouté. Cet anticorps est conjugué à une enzyme, comme la peroxydase de radis (HRP).
➜ Lavage : Après incubation, les puits sont lavés pour éliminer l'anticorps secondaire non lié.
➜ Réaction avec le substrat : Un substrat spécifique est ajouté et réagit avec l'enzyme induisant un changement de couleur proportionnel à la quantité d'anticorps primaire présents dans l'échantillon.
➜ Mesure : La densité optique (DO) est mesurée à l’aide d’un lecteur de plaques. L'intensité du signal (changement de couleur) est proportionnelle à la quantité d’anticorps spécifiques dans l’échantillon.
PRINCIPE DE L'ELISA COMPÉTITION
Dans l’ELISA compétition, l’objectif est de mesurer la quantité d'anticorps spécifiques dans un échantillon en évaluant leur capacité à interférer avec un anticorps marqué pour se lier à un antigène commun. Ce type de test est souvent utilisé pour détecter la présence d'anticorps dans des situations où la détection directe est moins efficace.
➜ Immobilisation de l'antigène : L’antigène cible est fixé dans les puits de la plaque ELISA.
➜ Saturation : Une solution de saturation est utilisée pour minimiser les interactions non spécifiques.
➜ Ajout de l'échantillon (première étape d'incubation) : L’échantillon contenant les anticorps spécifiques (sérum, plasma, lait) est ajouté aux puits. Les anticorps présents dans l’échantillon se lieront à l’antigène immobilisé. Cette incubation permet aux anticorps de l’échantillon de commencer à se fixer sur l’antigène.
➜ Lavage : Un lavage est effectué pour éliminer l'excès d'échantillon non lié et toute autre substance non spécifiquement liée à la surface de la plaque.
➜ Ajout de l'anticorps marqué (deuxième étape d'incubation) : Après lavage, un anticorps marqué (conjugué à une enzyme, HRP) est ajouté. Cet anticorps marqué, spécifique de l'antigène, va maintenant entrer en compétition avec les anticorps de l’échantillon pour se lier à l’antigène immobilisé.
➜ Lavage : Un lavage supplémentaire est effectué pour éliminer l'excès d'anticorps marqué non lié.
➜ Détection : Un substrat spécifique pour l'enzyme liée à l'anticorps marqué est ajouté. La réaction entre l'enzyme et le substrat génère un signal détectable, tel qu'un changement de couleur.
➜ Mesure : L'intensité du signal est mesurée à l’aide d’un lecteur de plaque. Un signal plus faible indique une forte compétition, c’est-à-dire une plus grande quantité d’anticorps spécifiques dans l’échantillon, tandis qu’un signal plus élevé indique moins de compétition et donc moins d’anticorps spécifiques dans l’échantillon.