L'ELISA repose sur l'interaction spécifique entre un antigène et un anticorps. Elle utilise une enzyme comme marqueur pour générer un signal détectable, souvent une couleur, qui est proportionnel à la quantité de substance ciblée présente dans l'échantillon. L'ELISA est largement utilisée en raison de sa sensibilité, de sa spécificité et de sa capacité à analyser un grand nombre d'échantillons simultanément.
Notre expertise en ELISA
Chez BioSellal, notre équipe d'experts se consacre au développement, à l'optimisation et à la validation de kits ELISA afin de répondre aux besoins actuels en diagnostic. Nos réactifs ELISA sont conçus pour offrir une détection à la fois sensible et spécifique des anticorps dirigés contre les pathogènes d’intérêt chez différentes espèces animales. Ces outils diagnostiques sont essentiels pour le contrôle des maladies infectieuses au sein des troupeaux.
Nos kits sont validés selon les normes françaises U47-310 et U47-019 (AFNOR).
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PRATICITÉ
Nos réactifs ELISA sont prêts à l'emploi et colorés pour permettre une distinction facile. Nos kits sont monocupules et en barrettes sécables.
RAPIDITÉ
Nous proposons des protocoles d'incubation court pour la plupart de nos réactifs ELISA.
FIABILITÉ
Nous proposons un échantillon traceur pour chaque application afin d'assurer la qualité de vos résultats.
Pour améliorer le suivi de nos résultats dans le temps, nous suggérons l'utilisation d'échantillons traceurs faiblement positifs prêts à l'emploi (MRI, matériau de référence interne). Cela permet de suivre la fiabilité du test grâce à une carte de contrôle. Il est recommandé d'en l'utiliser pour chaque test.
Pour en savoir plus sur nos applications ELISA et nos solutions de diagnostic, n'hésitez pas à nous contacter.
A propos de la technique ELISA
PRINCIPE DE L'ELISA INDIRECT
Cette technique permet donc de détecter et de quantifier les anticorps spécifiques contre un antigène donné dans un échantillon, en exploitant la spécificité des interactions antigène-anticorps et des anticorps secondaires marqués. Voici les étapes principales :
➜ Immobilisation de l'antigène : On commence par recouvrir les puits d'une plaque de microtitration avec un antigène spécifique. Cet antigène est celui contre lequel les anticorps que l'on souhaite détecter sont dirigés. Après l'immobilisation, les puits sont lavés pour enlever l'excès d'antigène non lié.
➜ Blocage : Pour éviter les réactions non spécifiques, on ajoute une solution de blocage qui recouvre les sites de liaison non spécifiques sur la surface des puits.
➜ Incubation avec l'échantillon : L'échantillon contenant les anticorps potentiels (sérum du patient, par exemple) est ajouté aux puits. Si les anticorps ciblant l'antigène sont présents, ils se lieront à l'antigène immobilisé.
➜ Lavage : Les puits sont lavés pour enlever tous les composants de l'échantillon non liés, y compris les anticorps qui ne reconnaissent pas l'antigène.
➜ Détection des anticorps : On ajoute un second anticorps, dit "anticorps de détection", qui est spécifique au type d'anticorps présent dans l'échantillon (par exemple, anti-IgG humaine si on cherche des IgG humaines). Cet anticorps de détection est conjugué à une enzyme.
➜ Lavage : Un nouveau lavage est effectué pour enlever tout anticorps de détection non lié.
➜ Substrat de l'enzyme : Un substrat est ajouté qui réagit avec l'enzyme conjuguée à l'anticorps de détection. Cette réaction produit un changement de couleur ou une fluorescence qui peut être mesurée.
➜ Mesure : La lecture optique est réalisée à l'aide d'un lecteur de plaque. L'intensité de la couleur ou de la fluorescence mesurée est proportionnelle à la quantité d'anticorps spécifiques présents dans l'échantillon.
PRINCIPE DE L'ELISA COMPÉTITION
Dans l'ELISA compétition pour la détection d'anticorps, l'objectif est de mesurer la présence et la quantité d'anticorps spécifiques dans un échantillon en évaluant leur capacité à concurrencer un anticorps de référence pour se lier à un antigène commun. Voici les étapes principales :
➜ Immobilisation de l'antigène : L'antigène cible est immobilisé dans les puits d'une plaque ELISA.
➜ Blocage : Les puits sont traités avec une solution de blocage pour réduire les interactions non spécifiques.
➜ Incubation avec échantillon et anticorps marqué : Un mélange de l'échantillon test (qui contient potentiellement les anticorps compétiteurs) et d'un anticorps spécifique à l'antigène marqué (généralement avec une enzyme ou un fluorophore) est ajouté aux puits. Les anticorps dans l'échantillon et l'anticorps marqué vont compétitionner pour la liaison à l'antigène immobilisé.
➜ Lavage : Après l'incubation, un lavage est effectué pour éliminer les anticorps non liés et l'excès d'anticorps marqué.
➜ Détection : Un substrat approprié à l'enzyme conjuguée à l'anticorps marqué est ajouté. La réaction entre l'enzyme et le substrat génère un signal détectable (changement de couleur, fluorescence, etc.).
➜ Mesure : L'intensité du signal est mesurée. Une forte intensité de signal indique une faible compétition par les anticorps de l'échantillon (moins d'anticorps spécifiques dans l'échantillon), tandis qu'une faible intensité de signal indique une forte compétition (plus d'anticorps spécifiques présents).