Dans le contexte du diagnostic des maladies infectieuses, la réaction en chaîne par polymérase en temps réel (PCR en temps réel) est une technique utilisée pour détecter des segments spécifiques du génome d'un pathogène en amplifiant l'ADN au cours de cycles d'amplification.
Notre expertise en PCR en temps réel (qPCR / RT-PCR)
Chez BioSellal, nous allions une expertise approfondie en bioinformatique à une maîtrise avancée de l'optimisation et de la validation des kits PCR en temps réel (qPCR ou RT-PCR). Nous vous proposons des réactifs conçus pour un diagnostic rapide et fiable des maladies infectieuses, qu'il s'agisse de santé animale, humaine ou environnementale. Les analyses réalisées avec nos réactifs permettent un contrôle efficace des épidémies.
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PRATICITÉ
Nos réactifs qPCR sont prêts à l'emploi et de couleur bleue pour une distinction facile et rapide. Ils peuvent être utilisés sur tous les thermocycleurs ouverts.
QUALITÉ
Nos kits qPCR sont validés selon les normes françaises en vigueur et évalués par les principaux Laboratoires de Référence Européen et Internationaux.
FIABILITÉ
Tous nos kits qPCR sont fournis avec au moins un IPC (endogène et/ ou exogène) pour vous assurer la qualité de l'extraction sur toutes les matrices.
ADAPTABILITÉ
Nous vous proposons des programmes de qPCR identiques au sein d'une même espèce. Tous les kits pour les pathogènes à l'ADN sont validés avec une étape de RT pour permettre une approche de diagnostic syndromique.
Pour en savoir plus sur nos applications PCR en temps réel et nos solutions de diagnostic, n'hésitez pas à nous contacter.
Maximisez les performances de vos analyses, optez pour nos kits conçus pour être utilisés avec l’appareil Mic.
Assurez une efficacité sans précédent du début à la fin de votre processus diagnostique grâce à Myra, notre appareil de distribution de liquides.
Découvrez comment nos solutions peuvent transformer vos opérations diagnostiques en explorant davantage notre site.
Mic
✔ Le Mic est le thermocycleur de PCR en temps réel le plus compact et robuste du marché avec un poids de seulement 2kg (15x15x13cm).
✔ Facile à utiliser, il ne nécessite aucune calibration et aucun entretien.
Myra
✔ Le Myra est un système de manipulation de liquides capable de pipetter des volumes entre 1 µL et 50 µL et de préparer une plaque PCR en moins de 5 min.
✔ Il prend en charge tous les supports (plaques Deep well, plaques qPCR, tubes...)
A propos de la technique de PCR en temps réel
PRINCIPE DE BASE
La PCR en temps réel TaqMan est une technique de biologie moléculaire utilisée pour la détection et la quantification spécifiques de l'ADN. Elle utilise des sondes fluorescentes appelées sondes TaqMan, qui contiennent un marqueur fluorescent et un quenchers (agent de quenching). Pendant la réaction, la sonde se lie à une séquence cible spécifique d'ADN dans l'échantillon. Lors de chaque cycle d'amplification, la polymérase exonuclease (Taq polymérase) dégrade la sonde, libérant le marqueur fluorescent. Cette libération est détectée et quantifiée en temps réel grâce à un appareil de PCR en temps réel. La fluorescence émise est directement proportionnelle à la quantité d'ADN cible.
COMPOSANTS CLÉS INCLUS DANS NOTRE MASTER MIX DE RÉACTION PRÊT À L'EMPLOI
➜ Amorces spécifiques à l'ADN cible : Des oligonucléotides courts qui délimitent la région de l'ADN à amplifier.
➜ Sonde TaqMan : Une sonde oligonucléotidique fluorescente spécifique qui s'hybride à l'intérieur de la région d'ADN ciblée par les amorces. Cette sonde est marquée avec un fluorophore à une extrémité et un quencher à l'autre. Tant que la sonde est intacte, le quencher inhibe la fluorescence émise par le fluorophore.
➜ Master Mix : Une solution préparée qui contient la majorité des composants nécessaires pour mener à bien une réaction de PCR. Cela inclut généralement l'ADN polymérase, les dNTPs (nucléotides), les tampons appropriés et parfois des agents de stabilisation ou des améliorateurs de réaction.
MÉCANISME
➜ Hybridation : Pendant les cycles de PCR, les amorces s'hybrident spécifiquement à leur séquence cible sur l'ADN, et la sonde TaqMan s'hybride également dans la région délimitée par les amorces.
➜ Élongation et clivage : Lors de l'élongation, l'ADN polymérase synthétise un nouveau brin d'ADN. En rencontrant la sonde TaqMan, l'activité exonucléase 5'→3' de l'enzyme clive la sonde, séparant le fluorophore du quencher.
➜ Fluorescence : Une fois séparé du quencher, le fluorophore émet de la lumière sous une excitation lumineuse spécifique. L'intensité de cette fluorescence est proportionnelle à la quantité d'ADN cible amplifié.
MULTIPLEXAGE
La PCR en temps réel multiplex permet la détection et la quantification simultanées de plusieurs séquences d'ADN ou d'ARN en utilisant des sondes fluorescentes distinctes, chacune marquée avec un fluorophore différent.
Les kits BioSellal sont des kits multiplex, utilisant les canaux de détection standards : FAM – VIC/HEX – CY5 – ROX/TexasRed
➜ Avantages :
✔ Efficacité : Réduit le nombre de réactions nécessaires en permettant l'analyse de plusieurs gènes ou pathogènes en une seule réaction. Cela économise du temps et des ressources.
✔ Économie de matériau : Diminue la quantité d'échantillon nécessaire pour les analyses, ce qui est particulièrement précieux lorsqu'on travaille avec des échantillons limités.
✔ Rapidité et haute sensibilité : Permet une détection rapide et sensible de plusieurs cibles, essentielle pour le diagnostic rapide de maladies infectieuses ou la recherche de mutations génétiques.
➜ Défis :
✔ Conception des amorces et sondes : La conception doit éviter les interactions croisées entre les amorces et les sondes, qui pourraient mener à des amplifications non spécifiques ou à des interférences fluorescentes.
✔ Optimisation de la réaction : L'équilibrage des différents composants pour chaque cible est crucial pour assurer une amplification efficace sans compromettre la réaction globale.
BioSellal relève avec succès ces défis, tout en assurant un haut niveau de performance technique !